產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 |
HRbio™ Probe qPCR Mix hUDG熱啟動探針法定量PCR Mix（含抗體修飾熱啟動酶+hUDG） | HRF0071 | 100T |
產品描述
HRbio™ Probe qPCR Mix hUDG 是一款適用于DNA模板(如DNA病毒)的探針法qPCR DNA 聚合酶，以其的定量性被廣泛應用，并能有效的防止污染，核心組分Taq HS DNA Polymerase是基于抗體法修飾，經過升級改造提升模板親和能力的新一代熱啟動DNA聚合酶。
產品組分
Mix 組分 | (100T) |
5×qPCR Buffer | 1000 μL |
Probe qPCR Mix hUDG | 120 μL |
a、內含dUTP 及含鎂離子 buffer.
b、內含 AB-HS Taq DNA polymerase
運輸與保存方法
-20 ℃,保質期1年。
產品特點
1、qPCR反應；
2、高特異性和高靈敏度。
體系配制（以50μL反應體系為例）
組分 | 體積 |
5×qPCR Buffer | 10 μL |
上游引物（20μM） | 0.5μL(variable) |
下游引物（20μM） | 0.5μL(variable) |
探針（20μM） | 0.25μL(variable) |
DNA 模板 | 30 μL(variable) |
Probe AB-HS qPCR Mix | 1.2 μL |
volume | to 50 μL |
注： 1、引物一般在 0.1μM-1μM 之間進行調整，一般情況下引物濃度在 0.2μM可達到理想的檢測效果；
2、探針濃度一般在 50nM-250nM 質檢進行調整；
3、擴增片段的長度一般在 80bp-150bp 之間。
反應條件
步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 | 檢測熒光 |
25℃ | 5min | 1 | Off | |
預變性 | 95℃ | 3min | 1 | Off |
變性 | 95℃ | 15s | 45 | Off |
退火 | 60℃ | 30s | On |
注：1、預變性時間設置：由于本試劑用到的是抗體修飾酶，需要熱激活處理，一般建議預變性時間設為 95℃，3min。
退火溫度和時間設置：請根據引物的 Tm 值和目的基因的長度進行調整。
熱啟動探針法定量PCR Mix
結果分析
1.擴增結束無擴增曲線
1）建議加入高濃度和高質量的 DNA 模板確保反轉的成功；
2）引物是否降解，可以通過PAGE 膠確定其完整性；
3）反應循環數不夠，一般將循環數設為 40-45 個循環；
4）確認PCR 程序設置中是否設置了熒光采集過程。
2.CT 值出現過晚
1）反應條件不夠優化，可適當降低退火溫度；
2）模板濃度過低或加樣量不足；
3）PCR 產物過長，一般PCR 產物推薦長度為 80-150bp。
3.陰性對照有明顯擴增
1）Mix 液、ddH2O、引物和探針可能存在污染，更換新的重新進行實驗。
注意事項
本產品僅供科研用途！
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