ELISA試劑盒為什么要嚴格按照說明書操作

    ELISA試劑盒為什么要嚴格按照說明書操作

    每一個試劑盒里都會有對應的說明書，注意事項里大多都會提到“實驗嚴格按照說明書的操作進行”。為什么要嚴格按照說明書操作?為了更完整的回答這個問題，需要先回顧一下ELISA各種方法的原理。

    根據試劑的來源和標本的性狀及檢測的具體條件，可設計出不同類型的檢測方法。大致分為以下幾類：

    1.雙抗體夾心法測抗原;2.雙抗原夾心法測抗體;3.競爭法測抗原;4.間接法測抗體

    elisa試劑盒檢測方法

    回顧完原理，下面總結如果不按說明書操作可能會出現的不滿意結果。

    1.先說嚴重的操作錯誤，看錯或壓根不看試劑盒配套說明書，不按操作步驟加樣。比如把競爭法的試劑盒當作雙抗體夾心法來做，導致的結果就是整板顯示很強的藍色，無任何梯度。

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    2.混用別的試劑盒里的試劑。不同廠家或者相同廠家的不同試劑盒，所含的試劑成分很可能是不一樣的，混用導致的結果是，浪費珍貴的樣本，樣品的回收率達不到預期值，如果混用不同試劑盒的酶復合物，會導致顯色過弱或過強，因為每種試劑盒所用酶復合物效價可能不一樣。

    3.不看文獻或者不做預實驗。比如某個試劑盒按照其靈敏度范圍和文獻報道推算樣本應該1:10稀釋，結果稀釋成1:1000，導致的結果是顯色過弱，結果不可用。

    4.不校準移液器及培養箱的溫度濕度。導致工作試劑濃度不準確，孵育溫度不合適，實驗帶來誤差。

    5.洗滌不充分，每孔洗液加樣過少，或者殘留。導致的結果是顯色過快，同時背景較高。

    6.手洗板時所用槍頭沒有懸空加入洗液，導致洗液污染，整個實驗失敗。

    7.剩余酶標板條未及時放入干燥袋，導致酶標板受潮，下一次再做時，顯色過弱或污染，CV值過高。

    8.試劑盒保存條件不當。試劑盒要求放4℃的，放在了-20℃。或者要求放-20℃的，放在了4℃。均會導致試劑盒敏感性下降。

    注：以上僅供參考！

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