一、操作前準備
1、清洗與消毒
拆解清洗：將反應器各部件(罐體、管路、電極等)拆解后，分別用洗潔精和1%*溶液浸泡清洗，純化水沖洗10次以上。
消毒處理：清洗后的部件用消毒液(按比例稀釋)浸泡30分鐘，晾干后避免直接接觸表面。
傳感器維護：pH電極浸泡于飽和KCl溶液，溶氧(DO)電極更換電解液并排除氣泡，極化6小時以上。
2、罐體裝配
密封安裝：將罐蓋與罐體底座對齊，用內六角工具對角均勻擰緊螺絲，確保密封性。
管路連接：通過硅膠管或快接頭連接補料瓶、排氣瓶、取樣瓶等，電極插入對應接口后手動擰緊。
二、上罐操作
1、細胞接種
將預培養的細胞懸液混合均勻后計數，轉移至接種瓶并與反應器進液管無菌連接。
使用壓縮空氣將細胞懸液壓入反應器，避免細胞沉降結團。
2、參數初始化
環境設置：溫度設為37℃(哺乳動物細胞)，溶氧40%，pH 7.0左右，通過控制面板啟動自動調節。
補料與通氣：蠕動泵控制補液速率，進氣系統調節氧氣壓力至0.1MPa，確保溶氧穩定。
三、培養過程控制
1、動態監測
傳感器聯動：實時監測溫度、pH、DO等參數，控制器自動調節攪拌速度(100–300 rpm)和補料速率。
在線取樣：每24小時取樣檢測細胞密度和代謝狀態，取樣后管路末端浸入75%酒精防止污染。
2、污染防控
操作全程保持無菌環境，使用火焰消毒連接口，避免外界雜質進入。
四、下罐操作與維護
1、終止培養
關閉自動控制模塊，通過壓縮空氣將培養液排入廢液桶，斷開電極連接。
2、清洗與存儲
拆卸罐體組件，用純化水沖洗后以0.1M NaOH溶液浸泡過夜，徹底去除生物殘留。
干燥后存放于通風處，電極單獨存放于專用包裝盒。
五、關鍵注意事項
1、密封性檢查：裝配后需進行壓力測試，避免培養過程中泄漏。
2、參數校準：每次使用前需校正pH和DO電極，確保數據準確性。
3、規模放大：遵循恒定的通氣體積與液體體積比(VVM)，保障溶氧傳遞效率一致。
通過以上步驟，不銹鋼細胞生物反應器可實現從實驗室到中試規模的穩定細胞培養，適用于抗體生產、疫苗開發等高精度生物工藝。
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